动物细胞在体外培养时，容易发生细胞结团现象，引发氧气供应不足、代谢废物积累、营养不足等问题，从而导致细胞死亡。葡聚糖硫酸盐是一种常用的抗结团物质，有效缓解细胞结团现象。但有研究表明葡聚糖硫酸盐具有一定毒性，在生物样品中需要将其去除，以保证药物安全。
金沙集团1862cc客户Biogen（渤健生物）在《Chromatography B》杂志发表文章，文中采用金沙集团1862cc体积排阻色谱柱Zenix SEC-150建立蛋白样品中葡聚糖硫酸盐残留检测方法。
背景介绍
葡聚糖硫酸盐是一种白色至灰白色粉末，易溶于水，并以钠盐形式存在，分子量范围3 kDa至2000 kDa。葡聚糖硫酸盐可作为抗凝剂、抗病毒药物以及辅料。在细胞培养基中加入平均分子量为8000 Da的葡聚糖硫酸盐，可抑制蛋白质与细胞壁的结合，从而提高细胞的生长和生产力。经实验发现，葡聚糖硫酸盐具有一定毒性，它的毒性依赖于剂量和分子量以及给药途径。研究显示对一组兔子每日服用20 mg/Kg葡聚糖硫酸盐两周会造成全身毒性作用。因此，需要采用合适的分析方法控制或者检测葡聚糖硫酸盐在生物样品的含量，保证药物的质量安全。
文章概述
文中基于金沙集团1862ccZenix SEC-150体积排阻色谱柱建立蛋白中葡聚糖硫酸盐检测方法。蛋白与葡聚糖硫酸盐结合，直接色谱分离并不适用，需要先进行预处理；另一方面，葡聚糖硫酸盐的检测需要高灵敏度的方法，直接定量检测的方式不适用，此前尚无合适的检测方式。文章开发的方法采用三氯乙酸（TCA）沉淀蛋白质，使葡聚糖硫酸盐游离。体积排阻色谱柱Zenix SEC-150分离后洗脱液通过10 μL生物相容性PEEK静态混合器进行柱后衍生，二亚甲基蓝与葡聚糖硫酸盐反应形成葡聚糖硫酸盐-DMB染料复合物，通过复合物的全波长扫描，确定最大吸收波长，结合SEC-HPLC检测。
图1. 硫酸葡聚糖-DMB染料复合物全波长扫描及530 nm色谱图
全波长扫描显示葡聚糖硫酸盐-DMB染料复合物在530 nm可见光处有最大吸收。确定波长为530 nm，使用金沙集团1862ccZenix SEC-150（3 μm，7.8 × 300 mm）色谱柱进行分离，测定葡聚糖硫酸盐的含量，该方法显示具有良好的分离效果，专属性验证合格。
图2.专属性验证
葡聚糖硫酸盐检测方法学验证表明该方法线性范围范围从1.0 μg/mL 到10.0 μg/mL的标准曲线，决定系数（r2）≥0.99。对LOD和LOQ测定显示LOD为0.3 μg/mL，蛋白样品中的葡聚糖硫酸盐的LOQ为1.5 μg/mL或0.02 mg/g蛋白。回收率范围为91%到105%，中间精密度验证表明3个制备样的葡聚糖硫酸盐浓度的%RSD以及3天内总体的%RSD低于5%。
结论
Conclusion
文章采用金沙集团1862ccZenix SEC-150色谱柱测定蛋白样品葡聚糖硫酸盐含量，该方法样品处理简单，分析时间短，易于开展，经方法验证可用于高浓度纯化的蛋白产品中的残留葡聚糖硫酸盐的定量检测。
[1] Tazi, Loubna, M, et al. Determination of residual dextran sulfate in protein products by SEC-HPLC[J]. Journal of chromatography, B. Analytical technologies in the biomedical and life sciences, 2016, 1011:89-93.
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